DBS22 007-2013 食品安全地方标准 水产品中炔诺酮的测定 ELISA法
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ID： |
37E64D6DA82345A6AA6B1EA34952265B |
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0.24 |
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5 |
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文件格式： |
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日期： |
2013-10-9 |
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DBS22,吉林省地方标准,DBS22/007—2013,食品安全地方标准,水产品中炔诺酮的测定 ELISA 法,2013 - 10 - 08 发布 2013 -10 - 08 实施,吉林省卫生厅 发布,DBS22/007—2013,I,前 言,本标准起草单位：长春市水产品质量安全检测中心,本标准主要起草人：闫先春、杨炳坤、杨立军、王雅倩、修磊,DBS22/007—2013,1,食品安全地方标准,水产品中炔诺酮的测定 ELISA 法,1 范围,本标准规定了水产品中炔诺酮的酶联免疫测定方法,本标准适用于水产品中炔诺酮的快速筛选检测,本标准的检出限为2 μg/kg,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法,SC/T 3016 水产品抽样方法,3 原理,利用ELISA抗原抗体的特异性反应，样本中残留的炔诺酮和预包被的偶联抗原竞争炔诺酮抗,体，加入酶标二抗显色后，样本吸光值与其所含残留物炔诺酮的含量成负相关，外标法定量,4 试剂与材料,除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T 6682一级水的标准,4.1 亚硝基铁氰化钠（C5FeN6Na2O.2H2O）,4.2 硫酸锌(ZnSO4.7H2O) ,4.3 乙腈,4.4 氢氧化钠,4.5 0.36 moL/L 亚硝基铁氰化钠溶液:称取10.7 g 亚硝基铁氰化钠加100 mL 水溶解混匀,4.6 1 moL/L 硫酸锌溶液:称取28.8 g 硫酸锌加100 mL 水溶解混匀,4.7 0.1 moL/L 氢氧化钠溶液:称取0.4 g 氢氧化钠加100 mL 水溶解混匀,4.8 乙腈-0.1 moL/L 氢氧化钠溶液:量取84 mL 乙腈加入到16 mL 0.1 moL/L 氢氧化钠溶液中混匀,4.9 试剂盒提供试剂包括：96 孔酶标板、标准液、高浓度标准品、酶标二抗、抗体工作液、底物液、,终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液,4.10 刻度移液管：10 mL,4.11 洗耳球,4.12 玻璃试管：10 mL,4.13 聚苯乙烯离心管：2 mL、50 mL,DBS22/007—2013,2,5 仪器与设备,5.1 酶标仪或酶联免疫分光光度计(450 nm) ,5.2 天平：感量 0.01 g,5.3 洗板机,5.4 旋转蒸发仪/氮气吹干装置,5.5 均质器,5.6 振荡器,5.7 涡旋仪,5.8 离心机(4000r/min) ,5.9 微量移液器：单道 20 μL～200 μL、100 μL～1000 μL、多道250 μL,6 测定方法,6.1 制备与保存,6.1.1 抽样：按SC/T 3016-2004 的方法进行,6.1.2 保存：样品经处理后，取可食部分（苗种取全身）100 g，用均质器捣碎，装入样品袋，标明标,记，放入-18℃冰柜中冷冻保存,6.2 提取纯化,6.2.1 称取2.0±0.05 g 均质物至50 mL 聚苯乙烯离心管中，加入7 mL 乙腈-0.1 moL/L 氢氧化钠溶,液（4.8），加入0.36 mol/L 硝基铁氰化钠溶液（4.5），1 moL/L 硫酸锌溶液（4.6）各500 μL，用,振荡器振荡10 min，3000 r/min，室温（20℃～25℃）离心10 min;,6.2.2 取1 mL 上清液至10 mL 玻璃试管中，于50℃～60℃水浴氮气流下吹干；,6.2.3 取1 mL 复溶工作液（4.9）复溶干燥的残留物；把提取得到的样本液与复溶工作液按照1︰4,体积比进行稀释（取100 μL 样本液+400 μL 复溶工作液），涡动混匀；取50 μL 用于分析,6.3 测定,6.3.1 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20℃～25℃）平衡30 min，注意每种液体试剂使用,前均须摇匀,6.3.2 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2℃～8℃,6.3.3 洗涤工作液在使用前也需回温,6.3.4 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2 孔平行，并记录标准孔和样,本孔所在的位置,6.3.5 加标准品/样本和抗体工作液：加标准品/样本50 μL/孔到对应的微孔中，再加入抗体工作液50,μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃环境中反应30 min,6.3.6 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液（4.9）250 μL/孔，充分洗涤4～5 次,每次间隔10 s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）,6.3.7 加酶标二抗：加入酶标二抗100 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于37℃环境中反应,30 min，取出重复洗板步骤6.3.6.,6.3.8 显色：加入底物液各50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃环境中避光显色15 min,DBS22/007—2013,3,6.3.9 测定：加入终止液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450 nm 处，在5 min 内读完数据,测定每孔OD 值,7 结果计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值除以空白样品的吸光度值，再乘,以 100%，即公式（1）：,E%=,A 0,A 別100%………………………………………………………（1）,式中：,E———百分吸光度值，%；,A———标准液或样品液吸光度值；,A0———空白样品吸光度值,以百分比吸光度值为……
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